elaboracion del medio de cultivo
ObjetivoEl objetivo de esta practica es a aprender como saber cuanto producto del medio de cultivo se vaciará a las cajas petri, además como poder utilizar los materiales de laboratorio adecuadamente y no hacer equivocaciones en las futuras practicas.
Materiales- 2 mecheros de bunsen- Medio de cultivo (polvo salmonella y shigella)- Balanza Granataria- Matraz Erlenmeyer 200ml- Vaso de precitado- Probeta graduada 100 ml- Vidrio de reloj- Torundas de algodón- Papel secante- Papel blanco- Agua destilada- Autoclave
DesarrolloSe utilizo la regla de tres para saber la cantidad de gramos que vamos a necesitar.Después se peso en el vidrio de reloj y se deposito directamente al matraz erlenmeyer de 250ml.
Séle depositaron 75 ml de agua destilada al matraz para 3 cajas petri con 25 ml cada una.
Se dejo reposar de acuerdo ala instrucciones del medio de cultivo, después se utilizaron guantes especiales y se paso por encima de la llama a fuego de muñeca hasta que este tuviera una ebullición.Una vez teniendo la ebullición se dejaba reposar durante 1 minuto, se etiquetaba, se tapaba con torundas de algodón y se pasaba a la autoclave.
Técnica de esterilización:Utilizamos la técnica de esterilización colocando el medio de cultivo en el matraz erlenmeyer en forma liquida en el autoclave, el medio de cultivo tenia un color rojo.Durante 20 minutos el autoclave estuvo a 15 libras de presión, un compañero estuvo calibrando el autoclave para que este no pasara de las 15 libras de presión.Una vez que quedo esterilizado el medio de cultivo en forma liquida, se retiro de la autoclave y se paso ala mesa, esta ya teniendo un campo de esterilización con 2 mecheros encendidos y un papel blanco.
Se realizo el vaciado en cajas petri poniendo en cada una 25 ml de medio de cultivo en forma liquida, una ves vaciado el contenido en las 3 cajas petri se dejo reposar manteniendo los mecheros encendidos y colocando las cajas petri sobre tapadas para que estas se hicieran en forma sólida, se etiquetaban y se ponían en el refrigerador.
Materiales de la práctica.
ConclusiónLa conclusión es que todos trabajemos mas en equipo mas de lo que ya lo hacemos para así poder hacer las practicas con el tiempo indicado si ningún inconveniente i así todos puedan aprender a usar los materiales de laboratorio sin ninguna equivocación.
viernes, 26 de junio de 2009
practica 2
esterilizacion
Introduccion:La autoclave es una herramienta muy peligrosa si no se sabe utilizar adecuadamente, para eso es esta práctica para aprender a utilizarla.Con esta práctica aprenderemos a utilizar la auto clave para así tener una mejor idea de ella y como utilizarla, para esto debemos seguir los pasos que nos da el instructor.
ObjetivoEl objetivo principal de esta práctica es la esterilización del material de laboratorio como lo son los matraces con el medio de cultivo, para que el producto no salga contaminado y así la practica salga mal, siguiendo los pasos dados nos saldrá la practica y aun mejor si usamos el autoclave.
MATERIALES:Matraces con medio de cultivo preparado.Agua destiladaAutoclaveGuantes para calibrar la autoclaveMesa de laboratorioCinta de esterilización
DESARROLLOYa terminado el medio de cultivo se paso a depositar el producto en la autoclave, junto con los demás medios de los compañeros de otros equipos.Ya terminado ese proceso se vertió agua destilada a la autoclave hasta donde marcaba la olla para su respectivo uso.Ya conectada la autoclave se paso a tapar la olla y así se empezó el proceso de esterilización, cuando esta llegaba a las 15 libras de presión se tenía que regular para que no pasara un accidente, para ello utilizábamos unos guantes para evitar quemaduras cuando liberábamos la válvula de presión ya que soltaba vapor a mucha presión, esto podría ocasionar accidentes por quemaduras de cierto grado.Llegado el tiempo de esterilización que era de 20 minutos liberamos la válvula para despejar la olla y así sacar el medio de cultivo, la dejamos reposar por unos minutos para evitar quemarnos con los matraces.Se desconecto la autoclave y pasamos a dejarla a su lugar de inicio.
Introduccion:La autoclave es una herramienta muy peligrosa si no se sabe utilizar adecuadamente, para eso es esta práctica para aprender a utilizarla.Con esta práctica aprenderemos a utilizar la auto clave para así tener una mejor idea de ella y como utilizarla, para esto debemos seguir los pasos que nos da el instructor.
ObjetivoEl objetivo principal de esta práctica es la esterilización del material de laboratorio como lo son los matraces con el medio de cultivo, para que el producto no salga contaminado y así la practica salga mal, siguiendo los pasos dados nos saldrá la practica y aun mejor si usamos el autoclave.
MATERIALES:Matraces con medio de cultivo preparado.Agua destiladaAutoclaveGuantes para calibrar la autoclaveMesa de laboratorioCinta de esterilización
DESARROLLOYa terminado el medio de cultivo se paso a depositar el producto en la autoclave, junto con los demás medios de los compañeros de otros equipos.Ya terminado ese proceso se vertió agua destilada a la autoclave hasta donde marcaba la olla para su respectivo uso.Ya conectada la autoclave se paso a tapar la olla y así se empezó el proceso de esterilización, cuando esta llegaba a las 15 libras de presión se tenía que regular para que no pasara un accidente, para ello utilizábamos unos guantes para evitar quemaduras cuando liberábamos la válvula de presión ya que soltaba vapor a mucha presión, esto podría ocasionar accidentes por quemaduras de cierto grado.Llegado el tiempo de esterilización que era de 20 minutos liberamos la válvula para despejar la olla y así sacar el medio de cultivo, la dejamos reposar por unos minutos para evitar quemarnos con los matraces.Se desconecto la autoclave y pasamos a dejarla a su lugar de inicio.
practica 3
Practica No. 3 Siembra
INTRODUCCIONEN ESTE TEMA DE SIEMBRA CONOCEREMOS LOS DIFERENTES TIPOS DE SIEMBRA QUE PODEMOS HACER EN UN MEDIO DE CULTIVO.
OBJETIVOESTA PRÁCTICA TIENE COMO OBJETIVO QUE NOSOTROS LOS ALUMNOS APRENDAMOS COMO HACER UNA SIEMBRA EN UN MEDIO DE CULTIVO HAY VARIOS TIPOS DE SIEMBRA DE LOS CUALES PODEMOS ESCOGER PARA HACER NUESTRA SIEMBRA LOS CUALES SON:KASS, AGOTAMIENTO, TAPIZ, SEPARAMIENTO, DISPERCION, SIEMBRA DE PROFUNDIDAD, MUSTREO.
DESARROLLO
MATERIALES:· ASA DE PLATINO· VASO DE PRECIPITADO CON AGUA DESTILADA 15 A 20ML· MECHERO DE BUNCEN· CAJAS PETRI CON MEDIO DE CULTIVO ELABORADO· PAPEL PARA CUBRIR MESA DE LABORATORIO· MASQUEN TAPE PARA ETIQUETAR CAJA PETRI· JERINGA DESECHABLE· TORNIQUETE· TORUNDAS DE ALGODÓN ALCOLIZADAS· TUBO DE ENSAYE (TAPON ROJO)· CENTRIFUGA· TUBO CONICO PARA ORINA· CUBRE Y PORTA OBJETO· HISOPO
MUESTRAS DE PRODUCTO DE DESECHO:
· TOMA DE MUESTRA 2.5ML SANGRE FRESCA (SE DEPOSITA EN TUBO CON TAPON ROJO)· ORINA· MUESTRA DE CABIDAD ORAL· AGUA PREPARADA EN LA CALLE (SABOR)· RASPADO INTERDIGITAL CON PORTAOBJETO
PROCEDIMIENTOCADA INTEGRANTE DEL EQUIPO AGARRO UNA CAJA PETRI DIFERENTE DE LAS 7 QUE TENIAMOS EN LA MESA DE LABORATORIO, Y EL PROFESOR DIO DIFERENTES INDICACIONES A CADA INTEGRANTE PARA HACER LA SIEMBRA SEGÚN LA MUESTRA QUE SE IVA A SEMBRAR.LA MUESTRA DE SANGRE PRIMERO LA EXTRAIMOS DE UNO DE LOS INTEGRANTES DEL EQUIPO, AL IGUAL QUE LA MUESTRA INTERDIGITAL, CABIDAD ORAL Y LA ORINA. LA SANGRE LA DEPOSITAMOS EN EL TUBO DE ENSAYE CON TAPON ROJO Y DESPUES PUSIMOS EL TUBO EN LA CENTRIFUGA A 1500 REVOLUCIONES DURANTE 5 MIN. YA PASADOS LOS 5 MIN. PASAMOS A RETIRAR NUESTRO TUBO DE ENSAYE Y EXTRAIMOS EL PLASMA PARA HACER UNA SIEMBRA CON EL, UN INTEGRANTE DEL EQUIPO EXTRAJO LA MUESTRA DE CABIDAD ORAL AL IGUAL QUE LA MUESTRA DE INTERDIGITAL, Y OCUPAMOS LA 1RA ORINA DEL DIA DE UN INTEGRANTE DEL EQUIPO Y TAMBIEN LA DEPOSITAMOS EN LA CENTRIFUGA A 1500 REVOLUCIONES DURANTE 5 MIN.PARA EMPEZAR A HACER NUESTRAS SIEMBRAS PRIMERO ESTERILIZAMOS UN ASA BACTEREOLOGICA, LA PASAMOS POR LA FLAMA DE LOS MECHEROS HASTA LOGRAR UN ROJO VIVO EN EL ASA, DESPUES PASAMOS EL ASA POR EL VASO DE PRECIPITADO QUE CONTENIA AGUA DESTILADA Y POR ULTIMO AGARRAMOS CADA QUIEN LA MUESTRA QUE IVA A SEMBRAR, LA MUESTRA DE CABIDAD ORAL LA OBTUVIMOS CON UN HISIPO QUE PASAMOS POR LA BOCA DE UNO DE LOS INTEGRANTES DEL EQUIPO Y LO SEMBRAMOS DIRECTAMENTE DEL HISOPO A LA CAJA PETRI CORRESPONDIENTE. Y POR ULTIMO YA SEMBRADAS LAS MUESTRAS CERRAMOS LAS CAJAS PETRI Y LAS ETIQUETAMOS CON LOS DATOS DEL PACIENTE, LA HORA, LA MESA, EL GRUPO Y QUIEN HABIA SEMBRADO LA MUESTRA. Y AL FINAL ENTREGAMOS LAS CAJAS AL PROFESOR
INTRODUCCIONEN ESTE TEMA DE SIEMBRA CONOCEREMOS LOS DIFERENTES TIPOS DE SIEMBRA QUE PODEMOS HACER EN UN MEDIO DE CULTIVO.
OBJETIVOESTA PRÁCTICA TIENE COMO OBJETIVO QUE NOSOTROS LOS ALUMNOS APRENDAMOS COMO HACER UNA SIEMBRA EN UN MEDIO DE CULTIVO HAY VARIOS TIPOS DE SIEMBRA DE LOS CUALES PODEMOS ESCOGER PARA HACER NUESTRA SIEMBRA LOS CUALES SON:KASS, AGOTAMIENTO, TAPIZ, SEPARAMIENTO, DISPERCION, SIEMBRA DE PROFUNDIDAD, MUSTREO.
DESARROLLO
MATERIALES:· ASA DE PLATINO· VASO DE PRECIPITADO CON AGUA DESTILADA 15 A 20ML· MECHERO DE BUNCEN· CAJAS PETRI CON MEDIO DE CULTIVO ELABORADO· PAPEL PARA CUBRIR MESA DE LABORATORIO· MASQUEN TAPE PARA ETIQUETAR CAJA PETRI· JERINGA DESECHABLE· TORNIQUETE· TORUNDAS DE ALGODÓN ALCOLIZADAS· TUBO DE ENSAYE (TAPON ROJO)· CENTRIFUGA· TUBO CONICO PARA ORINA· CUBRE Y PORTA OBJETO· HISOPO
MUESTRAS DE PRODUCTO DE DESECHO:
· TOMA DE MUESTRA 2.5ML SANGRE FRESCA (SE DEPOSITA EN TUBO CON TAPON ROJO)· ORINA· MUESTRA DE CABIDAD ORAL· AGUA PREPARADA EN LA CALLE (SABOR)· RASPADO INTERDIGITAL CON PORTAOBJETO
PROCEDIMIENTOCADA INTEGRANTE DEL EQUIPO AGARRO UNA CAJA PETRI DIFERENTE DE LAS 7 QUE TENIAMOS EN LA MESA DE LABORATORIO, Y EL PROFESOR DIO DIFERENTES INDICACIONES A CADA INTEGRANTE PARA HACER LA SIEMBRA SEGÚN LA MUESTRA QUE SE IVA A SEMBRAR.LA MUESTRA DE SANGRE PRIMERO LA EXTRAIMOS DE UNO DE LOS INTEGRANTES DEL EQUIPO, AL IGUAL QUE LA MUESTRA INTERDIGITAL, CABIDAD ORAL Y LA ORINA. LA SANGRE LA DEPOSITAMOS EN EL TUBO DE ENSAYE CON TAPON ROJO Y DESPUES PUSIMOS EL TUBO EN LA CENTRIFUGA A 1500 REVOLUCIONES DURANTE 5 MIN. YA PASADOS LOS 5 MIN. PASAMOS A RETIRAR NUESTRO TUBO DE ENSAYE Y EXTRAIMOS EL PLASMA PARA HACER UNA SIEMBRA CON EL, UN INTEGRANTE DEL EQUIPO EXTRAJO LA MUESTRA DE CABIDAD ORAL AL IGUAL QUE LA MUESTRA DE INTERDIGITAL, Y OCUPAMOS LA 1RA ORINA DEL DIA DE UN INTEGRANTE DEL EQUIPO Y TAMBIEN LA DEPOSITAMOS EN LA CENTRIFUGA A 1500 REVOLUCIONES DURANTE 5 MIN.PARA EMPEZAR A HACER NUESTRAS SIEMBRAS PRIMERO ESTERILIZAMOS UN ASA BACTEREOLOGICA, LA PASAMOS POR LA FLAMA DE LOS MECHEROS HASTA LOGRAR UN ROJO VIVO EN EL ASA, DESPUES PASAMOS EL ASA POR EL VASO DE PRECIPITADO QUE CONTENIA AGUA DESTILADA Y POR ULTIMO AGARRAMOS CADA QUIEN LA MUESTRA QUE IVA A SEMBRAR, LA MUESTRA DE CABIDAD ORAL LA OBTUVIMOS CON UN HISIPO QUE PASAMOS POR LA BOCA DE UNO DE LOS INTEGRANTES DEL EQUIPO Y LO SEMBRAMOS DIRECTAMENTE DEL HISOPO A LA CAJA PETRI CORRESPONDIENTE. Y POR ULTIMO YA SEMBRADAS LAS MUESTRAS CERRAMOS LAS CAJAS PETRI Y LAS ETIQUETAMOS CON LOS DATOS DEL PACIENTE, LA HORA, LA MESA, EL GRUPO Y QUIEN HABIA SEMBRADO LA MUESTRA. Y AL FINAL ENTREGAMOS LAS CAJAS AL PROFESOR
practica 4
OBSERVACION Macroscopica
INTRODUCCION Cuando se termino el proceso de siembra se pasó a dejar a la incubadora, ahora pasadas 24 horas veremos si hubo algún crecimiento de organismos en las cajas petri con medio de cultivo que sembramos.
ObjetivoEl objetivo de esta práctica fue el de reconocer los tipos de colonias observándolas a simple vista, en algunas cajas se observo crecimiento en otras no fue igual no se observo nada.Esta práctica tuvo como objetivo la identificación de colonias como antes ya había mencionado a simple vista identificar colores, olores, formas y medidas que estas tenían.
MATERIALESCajas petri con medio de cultivoVernier o pie de reyTorundas de algodón secas y con alcoholRegistro de las cajas petriMecheros de bunsenMesa de laboratorio con campo de esterilización
DESARROLLOSe observaron las cajas en varias de ellas se ve el crecimiento de algunos organismos.En la caja 1- no se presento algún organismoEn la caja 2- al parecer no se observo nadaEn la caja 3- se presento una colonia de microorganismosEn la caja 4- no se presento nadaEn la caja 5- se presentaron 3 colonias del mismo colorEn la caja 6- no se vio nadaEn la caja repetida que era la 3 no se vio nada.
INTRODUCCION Cuando se termino el proceso de siembra se pasó a dejar a la incubadora, ahora pasadas 24 horas veremos si hubo algún crecimiento de organismos en las cajas petri con medio de cultivo que sembramos.
ObjetivoEl objetivo de esta práctica fue el de reconocer los tipos de colonias observándolas a simple vista, en algunas cajas se observo crecimiento en otras no fue igual no se observo nada.Esta práctica tuvo como objetivo la identificación de colonias como antes ya había mencionado a simple vista identificar colores, olores, formas y medidas que estas tenían.
MATERIALESCajas petri con medio de cultivoVernier o pie de reyTorundas de algodón secas y con alcoholRegistro de las cajas petriMecheros de bunsenMesa de laboratorio con campo de esterilización
DESARROLLOSe observaron las cajas en varias de ellas se ve el crecimiento de algunos organismos.En la caja 1- no se presento algún organismoEn la caja 2- al parecer no se observo nadaEn la caja 3- se presento una colonia de microorganismosEn la caja 4- no se presento nadaEn la caja 5- se presentaron 3 colonias del mismo colorEn la caja 6- no se vio nadaEn la caja repetida que era la 3 no se vio nada.
practica 5
PRACTICA 5 FROITIS
OBJETIVOConocer esta técnica, conocer los pasos que esta debe de seguir y saber manejar adecuadamente los materiales para llevar acabo esta técnica.Saber realizar un frotis de buena manera.
PRACTICA 5 Elaboración de un frotis.
MATERIALES:Mesa de trabajoPortaobjetosCajas petri con medio de cultivoAsa bacteriológica2 mecheros de bunsenVaso de precipitado de 50 mlAgua destiladaPapel secante de color caféPapel para campo de esterilización ´
Investigación de un frotis.Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
PASOS PARA REALIZAR EL FROTIS.Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa.Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
DESARROLLOSe esterilizo la mesa de trabajo, posteriormente se pusieron todos los materiales en el centro de la mesa con 2 mecheros de bunsen prendidos a los lados para esterilizar el campo, se colocaron las 7 cajas petri, se utilizaron las que tenían colonias desarrolladas y con esas se trabajaron.Se tomo el asa bacteriológica y se expuso al mechero asta estar al rojo vivo, después se tomo una pequeña gota de agua destilada y se deposito en el portaobjetos en su parte central, después se tomo una pequeña muestra del medio de cultivo con el asa bacteriológica y se plasmo en el portaobjetos y deslizándola de derecha a izquierda se hizo una delgada película.Se paso el porta objetos por los mecheros las veces que sean necesarias para calentar lo suficiente, en pocas palabras asta lo que tu mano resista, si no lo soportas es que tus bacterias se quemaron y si los soportas el frotis esta listo.
OBJETIVOConocer esta técnica, conocer los pasos que esta debe de seguir y saber manejar adecuadamente los materiales para llevar acabo esta técnica.Saber realizar un frotis de buena manera.
PRACTICA 5 Elaboración de un frotis.
MATERIALES:Mesa de trabajoPortaobjetosCajas petri con medio de cultivoAsa bacteriológica2 mecheros de bunsenVaso de precipitado de 50 mlAgua destiladaPapel secante de color caféPapel para campo de esterilización ´
Investigación de un frotis.Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
PASOS PARA REALIZAR EL FROTIS.Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa.Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
DESARROLLOSe esterilizo la mesa de trabajo, posteriormente se pusieron todos los materiales en el centro de la mesa con 2 mecheros de bunsen prendidos a los lados para esterilizar el campo, se colocaron las 7 cajas petri, se utilizaron las que tenían colonias desarrolladas y con esas se trabajaron.Se tomo el asa bacteriológica y se expuso al mechero asta estar al rojo vivo, después se tomo una pequeña gota de agua destilada y se deposito en el portaobjetos en su parte central, después se tomo una pequeña muestra del medio de cultivo con el asa bacteriológica y se plasmo en el portaobjetos y deslizándola de derecha a izquierda se hizo una delgada película.Se paso el porta objetos por los mecheros las veces que sean necesarias para calentar lo suficiente, en pocas palabras asta lo que tu mano resista, si no lo soportas es que tus bacterias se quemaron y si los soportas el frotis esta listo.
practica 7
practicA 6.... TINCION DE GRAM
OBJETIVOConocer la técnica de tinción de Gram., conocer el procedimiento y observar las bacterias en microscopio clasificándolas en Gram. Positivas y Gram. Negativas.Utilizar correctamente los materiales en esta técnica de tinción.
Practica: 6 tinción de Gram.MATERIALESMesa de trabajoFrotis ya realizadoSoluciones de, cristal violeta, yodo lugol, acetona, safranina.Microscopio2 mecheros de bunsenAceite de inmersiónAsas bacteriológicasAgua destiladaVaso de precipitado de 50 mlCajas petri con medio de cultivoCampo de esterilizaciónPapel secanteTorundas de algodónINVESTIGACION DE TINCION DE GRAM:El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram. positivas como Graham negativas).El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina)Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste no arrastre más colorante.Sigue a tal tratamiento una coloración de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo.Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gramnegativos. Basándonos pues, en la reacción Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos.PASOS PARA LA TECNICA DE TINCION DE GRAM:prepara el frotis y fijar a calorcolocar la preparación con la solución de cristal violeta sumergirla durante(1mn)lavar con solución yodada (lugol)cubrir el frotis durante con solución lugol durante (1mn)escurrir y decolorar con alcohol hasta que no arrastre mas cristal violetalavar con agua corrientecontrastar con la solución safraninalavar con agua corriente y secar al aireobservar con el microscopio con una gota de aceite de inmersión en objetivo (100x)
DESARROLLO:Los materiales como las asas bacteriológicas no tienen nada que ver con la tinción de Gram., solo se volvieron a poner ala mesa por que algunos de los alumnos no pudieron completar la práctica a su tiempo y si había algún error en la tinción se tenía la oportunidad de volver hacer el frotis e intentar de nuevo la tinción.Se llevo el portaobjetos al lavamanos, se colocaron recipientes con las soluciones de (acetona, yugol, cristal violeta, safranina), se tomo el portaobjetos y se sumergió en el recipiente donde contenía el cristal violeta durante 1mn, después se sumergió en el yodo lugol durante 1mn, se lavo con la acetona hasta que ya no escurriera mas cristal violeta, posteriormente se sumergió en la safranian durante 1mn y finalmente se lavo con agua corriente, se seco al aire libre y séle coloco una gota de inmersión para fijarlo en el microscopio con objetivo 1000x.
Desarrollo grafico
Cristal violeta durante 1mn.
Yodo lugol durante 1mn
Se vacío acetona para limpiar el cristal violeta hasta que ya no escurriera más de este.
Se vacío safranina durante 1mn
Se lavo con agua corriente para limpiarlo de la safranina y se seco al aire libre.
Séle acho una pequeña gota de aceite de palo (aceite de inmersión) para su vista en el microscopio.
Se observo através del microscopio.
Se observaron bacilos, de color rojo y por lo tanto los microorganismos son gramnegativos.
CONCLUSIONLas bacterias que se observaron salieron de color rojo y eso quiere decir que salieron gramnegativas y supimos como manejar la tinción de Gram. Aunque hubo muchos errores, pero para la otra saldrá mucho mejor
OBJETIVOConocer la técnica de tinción de Gram., conocer el procedimiento y observar las bacterias en microscopio clasificándolas en Gram. Positivas y Gram. Negativas.Utilizar correctamente los materiales en esta técnica de tinción.
Practica: 6 tinción de Gram.MATERIALESMesa de trabajoFrotis ya realizadoSoluciones de, cristal violeta, yodo lugol, acetona, safranina.Microscopio2 mecheros de bunsenAceite de inmersiónAsas bacteriológicasAgua destiladaVaso de precipitado de 50 mlCajas petri con medio de cultivoCampo de esterilizaciónPapel secanteTorundas de algodónINVESTIGACION DE TINCION DE GRAM:El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram. positivas como Graham negativas).El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina)Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste no arrastre más colorante.Sigue a tal tratamiento una coloración de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo.Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gramnegativos. Basándonos pues, en la reacción Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos.PASOS PARA LA TECNICA DE TINCION DE GRAM:prepara el frotis y fijar a calorcolocar la preparación con la solución de cristal violeta sumergirla durante(1mn)lavar con solución yodada (lugol)cubrir el frotis durante con solución lugol durante (1mn)escurrir y decolorar con alcohol hasta que no arrastre mas cristal violetalavar con agua corrientecontrastar con la solución safraninalavar con agua corriente y secar al aireobservar con el microscopio con una gota de aceite de inmersión en objetivo (100x)
DESARROLLO:Los materiales como las asas bacteriológicas no tienen nada que ver con la tinción de Gram., solo se volvieron a poner ala mesa por que algunos de los alumnos no pudieron completar la práctica a su tiempo y si había algún error en la tinción se tenía la oportunidad de volver hacer el frotis e intentar de nuevo la tinción.Se llevo el portaobjetos al lavamanos, se colocaron recipientes con las soluciones de (acetona, yugol, cristal violeta, safranina), se tomo el portaobjetos y se sumergió en el recipiente donde contenía el cristal violeta durante 1mn, después se sumergió en el yodo lugol durante 1mn, se lavo con la acetona hasta que ya no escurriera mas cristal violeta, posteriormente se sumergió en la safranian durante 1mn y finalmente se lavo con agua corriente, se seco al aire libre y séle coloco una gota de inmersión para fijarlo en el microscopio con objetivo 1000x.
Desarrollo grafico
Cristal violeta durante 1mn.
Yodo lugol durante 1mn
Se vacío acetona para limpiar el cristal violeta hasta que ya no escurriera más de este.
Se vacío safranina durante 1mn
Se lavo con agua corriente para limpiarlo de la safranina y se seco al aire libre.
Séle acho una pequeña gota de aceite de palo (aceite de inmersión) para su vista en el microscopio.
Se observo através del microscopio.
Se observaron bacilos, de color rojo y por lo tanto los microorganismos son gramnegativos.
CONCLUSIONLas bacterias que se observaron salieron de color rojo y eso quiere decir que salieron gramnegativas y supimos como manejar la tinción de Gram. Aunque hubo muchos errores, pero para la otra saldrá mucho mejor
practica 7
PRACTICA 7: Observación macroscópica en objetivo de 100x con aceite de palo (de inmersión)
ObjetivoEn esta practica se vera acerca de la observación macroscópica en 100x con aceite de inmersión para poder identificar si los microorganismos son Gram positivos o Gram negativos. Y aprender a operar equipos de laboratorio.
Materiales- Laminilla de cristal teñida- Aceite de inmersión- Hoja de papel (cebolla)- Microscopio (compuesto o fotonico)- Torundas de algodón secas y alcoholizadas- Pape secante
DesarrolloEmpezando por acomodar el microscopio, limpiar el lente y poner el porta objeto teñido y listo con una gota de inmersión en el portaobjetos y después ponerlo en la platina, después ya haciendo esto se empieza a enfocar el microscopio para poder ver los microorganismos ya sean cocos o bacilos y ya haciendo esto y enfocando correctamente el resultado fue cocos Gram positivos y Gram negativos juntos.
ConclusiónBueno debemos aprender más acerca del enfoque para poder haci hacer trabajos más buenos y poder trabajar de una forma mejor y más organizada. Y también tener que leer más y seguir instrucciones para no cometer errores y que la práctica salga bien.
ObjetivoEn esta practica se vera acerca de la observación macroscópica en 100x con aceite de inmersión para poder identificar si los microorganismos son Gram positivos o Gram negativos. Y aprender a operar equipos de laboratorio.
Materiales- Laminilla de cristal teñida- Aceite de inmersión- Hoja de papel (cebolla)- Microscopio (compuesto o fotonico)- Torundas de algodón secas y alcoholizadas- Pape secante
DesarrolloEmpezando por acomodar el microscopio, limpiar el lente y poner el porta objeto teñido y listo con una gota de inmersión en el portaobjetos y después ponerlo en la platina, después ya haciendo esto se empieza a enfocar el microscopio para poder ver los microorganismos ya sean cocos o bacilos y ya haciendo esto y enfocando correctamente el resultado fue cocos Gram positivos y Gram negativos juntos.
ConclusiónBueno debemos aprender más acerca del enfoque para poder haci hacer trabajos más buenos y poder trabajar de una forma mejor y más organizada. Y también tener que leer más y seguir instrucciones para no cometer errores y que la práctica salga bien.
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